PCR vs Echtzeit-PCR
Die PCR- oder Polymerase-Kettenreaktion ist eine revolutionierte Entdeckung in der modernen Molekularbiologie, die erstmals 1983 vom Chemiker Kary Mullis entwickelt wurde. Sie ermöglicht die Amplifikation einer einzelnen Sequenz in einer komplexen DNA zur Analyse. Die Grundidee der PCR besteht darin, dass zwei Primer, die zu den entgegengesetzten Strängen einer DNA-Sequenz komplementär sind, aufeinander ausgerichtet sind; Die Primer produzieren komplementäre Stränge, die jeweils den anderen Primer enthalten. Das Ergebnis ist daher eine große Menge einer Sequenz, die der DNA entspricht, die zwischen den beiden Primern liegt. Das DNA-Polymeraseenzym wird verwendet, um die Primer in der PCR zu verlängern. DNA-Polymerase ist ein thermostabiles Enzym und hat die Fähigkeit, bei hohen Temperaturen (94 bis 95 ° C) zu überleben, die zur Denaturierung von Matrizen-DNA verwendet werden.
Die PCR umfasst drei Schritte, nämlich wiederholte Denaturierungsrunden, Annealing von Primern und Synthese von DNA. Eine Thermocycler-Maschine wird verwendet, um diese Reaktion durchzuführen, so dass sie so programmiert werden kann, dass sie die Temperaturen schnell und genau ändert. Anwendungen der PCR sind strafrechtliche Ermittlungen, DNA-Fingerabdruck, Nachweis von Krankheitserregern und Analyse der DNA früher menschlicher Spezies.
Was ist konventionelle PCR?
Es gibt drei Hauptstadien der herkömmlichen PCR, nämlich: DNA-Amplifikationsstufe, Trennung der PCR und Nachweis von Produkten. Die Trennung von DNA-Segmenten erfolgt typischerweise durch Agarosegelelektrophorese. Die Produkte werden dann mit Etheiduimbromid gefärbt. Schließlich wird die Detektion durch Visualisierung von Banden auf Gelen unter UV-Licht erreicht. Daher werden die Endergebnisse der herkömmlichen PCR nicht als Zahlen ausgedrückt. Normalerweise kann die konventionelle PCR nur einen einzigen Parameter erfassen.
Was ist Echtzeit-PCR?
Echtzeit-PCR kann die Amplifikation von Produkten während der Synthese der Produkte nachweisen. Mit der Entwicklung der Technologie ist die PCR zu einer sehr beliebten Technik geworden, insbesondere zum Nachweis und zur Identifizierung von Bakterien in Lebensmitteln. Die Echtzeit-PCR verwendet ein Fluoreszenzfarbstoffsystem und einen Thermocycler, die mit einer Fluoreszenzdetektionsfunktion ausgestattet sind.
Was ist der Unterschied zwischen konventioneller PCR und Echtzeit-PCR?
• Konventionelle PCR ist zeitaufwändiger, da die amplifizierte PCR-Produkte mithilfe der Gelelektrophorese analysiert werden. Im Gegensatz dazu ist die Echtzeit-PCR weniger zeitaufwendig, da sie Amplifikationen in den frühen Phasen der Reaktion erkennen kann.
• Die Echtzeit-PCR sammelt Daten in der exponentiellen Wachstumsphase der PCR, während die herkömmliche PCR Daten am Endpunkt der Reaktion sammelt.
• Die Endpunktergebnisse der herkömmlichen PCR sind möglicherweise nicht sehr genau, aber die Ergebnisse der Echtzeit-PCR sind sehr genau.
• Echtzeit-PCR ist empfindlicher als herkömmliche PCR.
• Konventionelle PCR hat eine sehr schlechte Auflösung, während Echtzeit-PCR aufgrund der hohen Auflösung nur sehr geringe Änderungen erkennen kann.
• Die Endpunkterkennung herkömmlicher PCR hat einen kurzen Dynamikbereich, während die Echtzeit-PCR-Erkennung einen großen Dynamikbereich aufweist.
• Im Gegensatz zur herkömmlichen PCR finden sich bei der Echtzeit-PCR automatisierte Detektionstechniken.
• Die konventionelle PCR ist hochentwickelt und arbeitsintensiver als die Echtzeit-PCR.
• Im Gegensatz zur Echtzeit-PCR kann die konventionelle PCR nicht zwischen toten und lebenden Bakterien unterscheiden.
• Die Echtzeit-PCR verwendet ein Fluoreszenzfarbstoffsystem zum Nachweis der Produkte, während die herkömmliche PCR Ethidiumbromid und UV-Licht verwendet, um Banden im Agarosegelmedium sichtbar zu machen.
