Hauptunterschied - Phusion vs Taq Polymerase
DNA-Polymerasen sind weit verbreitete Enzyme in molekularbiologischen Techniken und kommen natürlich auch in allen Organismen vor, die einer DNA-Replikation unterzogen werden. Sie sind die wichtigsten polymerisierenden Enzyme, die während der Replikation beteiligt sind. DNA-Polymerase ist in der Lage, Nukleotide an das freie 3'-Ende des DNA-Strangs hinzuzufügen, wodurch die Verlängerung eines neuen Strangs verursacht wird. Gegenwärtig ist es aufgrund der Entwicklungen der Molekularbiologie in der Krankheitsdiagnostik und in industriellen Anwendungen wichtig, Polymerasen mit verschiedenen vorteilhaften Eigenschaften herzustellen. Dies erhöht die Genauigkeit der Methode und macht sie zu einer schnelleren Technik. Phusion und Taq-Polymerase sind zwei kommerziell hergestellte thermostabile Polymeraseenzyme, die in speziellen molekularen Anwendungen verwendet werden. Phusion ist eine aus Pyrococcus furiosus isolierte DNA-Polymerase, die hauptsächlich in Klonierungsexperimenten verwendet wird, um die Wiedergabetreue zu erhöhen. Taq-DNA-Polymerase ist die Standard-DNA-Polymerase, die bei der Polymerasekettenreaktion (PCR) verwendet wird, und wird aus dem thermostabilen Bakterium isoliert. Thermus aquaticus. Der Hauptunterschied zwischen den beiden Enzymen ist der Quellmikroorganismus. Die Phusion wird aus dem Extremophilen Pyrococcus furiosus isoliert, während die Taq-Polymerase aus dem Thermophilen Thermus aquaticus isoliert wird. Die Taq-Polymerase wird aus dem Thermophil Thermus aquaticus isoliert. Die Taq-Polymerase wird aus dem Thermophil Thermus aquaticus isoliert.
INHALT
1. Überblick und Hauptunterschied
2. Was ist Phusion
? 3. Was ist Taq-Polymerase?
4. Ähnlichkeiten zwischen Phusion und Taq-Polymerase.
5. Vergleich nebeneinander - Phusion gegen Taq-Polymerase in tabellarischer Form.
6. Zusammenfassung
Was ist Phusion?
Die Phusions-DNA-Polymerase ist eine neuartige Polymerase, die durch Isolierung des Enzyms aus Pyrococcus furiosus, einem extremophilen Archaea, hergestellt wird. Diese Mikroben befinden sich unter extrem hohen Temperaturbedingungen, wodurch die Polymerase zu einer sehr hitzebeständigen Polymerase wird. Phusionspolymerase wird verwendet, um eine extreme Wiedergabetreue gegenüber der herkömmlichen thermostabilen Polymerase zu erzielen; Taq-Polymerase. Die Phusionspolymerase ist in der Lage, lange Matrizen mit bis zu 7,5 kb genomischer DNA zu amplifizieren. Die optimale Polymerisationsbedingungen Kapazität von Phusion Polymerase bei 72 0 C. Phusion auch in Produkten für die Klonierung Sequenzierung, die Expressionsanalyse und Mutationsanalyse verwendet wird.
Die Phusions-DNA-Polymerase hat die 3'-5'-Exonukleaseaktivität. Dies ermöglicht das Korrekturlesen des neu synthetisierten Strangs nach der Synthese. Daher können die Nukleotidfehlpaarungen leicht repariert werden. Somit hat es eine geringere Fehlerrate. Allgemeine Vorteile der Phusionspolymerase sind;
- Extreme Treue
- Hohe Geschwindigkeit und reduzierte Verlängerungszeit
- Robuste Reaktionen und erfordert minimale Optimierung
- Hohe Ausbeute
Abbildung 01: Phusion
Der Hauptnachteil der Phusionspolymerase besteht darin, dass sie in Gegenwart von Desoxyuridintriphosphat (dUTP) inhibiert wird. Wenn sich dUTPs im Reaktionsgemisch ansammeln, kann dies die Wirkung der Phusionspolymerase hemmen. Dies wird verhindert, indem das Reaktionsgemisch vor der Zugabe des Enzyms mit dUTPase behandelt wird. Gegenwärtig wird anstelle von Phusionspolymerase eine als Pfu Turbo bekannte dUTP-resistente Variante der Phusionspolymerase verwendet, um dieses Problem zu lösen.
Was ist Taq Polymerase?
Die Erfindung der Taq-DNA-Polymerase hat das Gebiet der Molekularbiologie revolutioniert. Es löste ein Hauptproblem bei der DNA-Amplifikation. Taq-DNA-Polymerase ist ein hitzebeständiges Polymeraseenzym, das aus dem thermophilen Bakterium Thermus aquaticus extrahiert und isoliert wird. Die Entdeckung dieser Enzyme führt zur Entwicklung der PCR. Dieses Enzym hat die Verwendung der Polymerasekettenreaktion bei der DNA-Amplifikation anstelle herkömmlicher mühsamer Klonierungstechniken ermöglicht. Die PCR wird heute in der Molekulardiagnostik sowie in der Landwirtschaft und in der Industrie eingesetzt, wobei der Technik viele neue Variationen hinzugefügt wurden.
Abbildung 02: Taq-Polymerase
Taq - DNA - Polymerase - Funktionen im optimalen Temperaturbereich zwischen 72 0 C - 80 0 C. Taq DNA - Polymerase - Cofaktor erfordert; Magnesium für seine Funktion. Taq-Polymerase hat nicht die Fähigkeit zum 3'-5'-Korrekturlesen, daher ist die Fehlerrate der Taq-DNA-Polymerase im Vergleich zu neueren Arten von DNA-Polymerasen wie Phusionspolymerase usw. hoch. Die Popularität der Taq-DNA-Polymerase bleibt jedoch die Gleiches gilt in der ganzen Welt der Wissenschaft aufgrund der Bequemlichkeit und Flexibilität des Enzyms.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Phusion und Taq-Polymerase?
- Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymeraseenzyme sind polymerisierende Enzyme, die in der Lage sind, Nukleotide an das freie 3'-Ende des DNA-Strangs hinzuzufügen.
- Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen erfordern eine Primersequenz, um die Polymerisation zu initiieren.
- Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen sind hitzebeständig.
- Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen werden in PCR-Mechanismen zur Amplifikation von DNA verwendet.
- Bei Zugabe der Polymerase zum Reaktionsgemisch werden zuletzt sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen zugegeben, um die Effizienz des Enzyms sicherzustellen.
- Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen werden für molekularbiologische Versuchszwecke kommerziell synthetisiert.
- Sowohl Phusions- als auch Taq-Polymerasen benötigen einen Cofaktor, um ihre Funktion zu vervollständigen.
Was ist der Unterschied zwischen Phusion und Taq Polymerase?
Diff Artikel Mitte vor Tabelle
Phusion gegen Taq Polymerase |
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| Phusion ist eine aus Pyrococcus furiosus isolierte DNA-Polymerase, die hauptsächlich in Klonierungsexperimenten verwendet wird, um die Wiedergabetreue zu erhöhen. | Taq-DNA-Polymerase ist die Standard-DNA-Polymerase, die bei der Polymerasekettenreaktion (PCR) verwendet wird, und wird aus dem thermostabilen Bakterium Thermus aquaticus isoliert. |
| Quellorganismus | |
| Die Phusion wird aus extremophilen Archaeen - Pyrococcus furiosus - extrahiert. | Diese literarischen Werke erstrecken sich von der Kolonialzeit bis zur Entkolonialisierung. |
| Korrekturlesen | |
| 3 '- 5' Korrekturlesefähigkeit ist in Phusion vorhanden. | In der Taq-Polymerase fehlt die Fähigkeit zum 3'-5'-Korrekturlesen. |
| Treue | |
| Bei Phusion gibt es High-Fidelity. | Die Taq-Polymerase zeigt eine geringe Wiedergabetreue. |
| Verstärkung | |
| Phusion kann lange DNA-Fragmente amplifizieren. | Taq-Polymerase ist in der Lage, viel kürzere DNA-Fragmente zu amplifizieren. |
| dUTP-Vergiftung | |
| Die Phusionswirkung wird durch die ungerade Akkumulation gehemmt. | Taq-Polymerase wird durch dUPT nicht gehemmt. |
Zusammenfassung - Phusion vs Taq Polymerase
Phusion und Taq-DNA-Polymerase sind zwei hitzestabile Polymerasen, die in PCR-Techniken verwendet werden. Phusion ist eine aus dem extremophilen Pyrococcus furiosus isolierte Polymerase, während Taq aus dem thermostabilen Bakterium Thermus aquaticus isoliert wird. Die Entdeckung der Taq-DNA-Polymerase führt zur PCR-Erfindung. Phusion hat viele Vorteile gegenüber Taq, was Phusion zu einer besseren Option bei der Herstellung von High-Fidelity-DNA gemacht hat. Taq-Polymerase wird jedoch weiterhin als Standard-Polymeraseenzym in der PCR verwendet. Dies ist der Unterschied zwischen Phusion und Taq-Polymerase.
