Hauptunterschied - Direkter und indirekter ELISA
Ein enzymgebundener Immunoassay (ELISA), auch als Enzymimmunoassay bekannt, ist ein serologischer Test, der Antikörper im Blut nachweist. Es wird als diagnostisches Instrument verwendet, um herauszufinden, ob der Patient einem bestimmten Virustyp oder einem anderen infektiösen Erreger (Antigen) ausgesetzt war und ob der Körper Antikörper gegen die Infektion produziert hat. ELISA kann auch die vergangenen und aktuellen Infektionen identifizieren. Daher wird der ELISA häufig von den Ärzten als Vorscreening-Test vor einer eingehenden Analyse von Krankheiten verwendet. Dieser Test kann im Labor durchgeführt werden, indem dem Patienten eine Blutprobe entnommen wird. Es gibt zwei Arten von ELISA-Tests: direkter ELISA und indirekter ELISA. Der Hauptunterschied zwischen direktem und indirektem ELISA besteht darin, dass der indirekte ELISA empfindlicher ist und die Zugabe eines sekundären Antikörpers erfordert, während der direkte ELISA weniger empfindlich ist und nur einen primären Antikörper verwendet.
INHALT
1. Überblick und Hauptunterschied
2. Was ist ein direkter ELISA
? 3. Was ist ein indirekter ELISA?
4. Vergleich nebeneinander - direkter und indirekter ELISA.
5. Zusammenfassung
Was ist ein direkter ELISA?
ELISA ist ein krankheitsdiagnostischer Test, der durchgeführt wird, um das Vorhandensein bestimmter Antigene oder Antikörper im Blut zu identifizieren. Es wird als Plattenassay durchgeführt. Es werden Antikörper verwendet, die mit leicht zu testenden Enzymen verknüpft sind. Das Vorhandensein von Antigenen in der Serumprobe bindet an spezifische Antikörper, die mit Enzymen verbunden sind. Im letzten Schritt wird ein spezifisches Substrat hinzugefügt, um mit dem Enzym zu reagieren. Das Enzym wandelt das Substrat in ein farbiges oder signalerzeugendes Produkt um. Die Farbänderung im chemischen Substrat zeigt das Vorhandensein eines bestimmten Antikörpers in der Serumprobe. Der direkte ELISA-Test verwendet nur einen primären Antikörper, der an das Enzym gebunden ist. Bei der Bindung an das Antigen ändert sich schnell die Farbe, was auf das Vorhandensein des Infektionserregers im Blut hinweist. Jedoch,Die Intensität der Signale ist im direkten ELISA schwächer, da die Epitope auf die Bindung der Antigene beschränkt sind. Daher ist der direkte ELISA im Vergleich zum indirekten ELISA weniger empfindlich.
Abbildung 01: Direkter ELISA-Test
Was ist ein indirekter ELISA?
ELISA kann unter Verwendung von zwei Arten von Antikörpern durchgeführt werden, nämlich; Primärantikörper und Sekundärantikörper. Das indirekte ELISA-Tool verwendet beide Arten von Antikörpern, um die Signale für einen besseren Nachweis zu verstärken. Die indirekte ELISA-Technik wird wie folgt durchgeführt.
- Die Platten werden mit Antigenen inkubiert und gewaschen, um die unspezifische Bindung zu blockieren.
- Dann werden Primärantikörper zugegeben und gewaschen.
- Enzymgebundene sekundäre Antikörper werden zugegeben und gewaschen.
- Ein Substrat wird zugegeben und mit Enzymen reagieren gelassen.
- Signale werden nachgewiesen und das Vorhandensein oder Fehlen des spezifischen Antigens in der Probe wird identifiziert.
Im indirekten ELISA-Test können mehrere Sekundärantikörper an einen einzelnen Primärantikörper binden. Sekundärantikörper sind mit leicht zu testenden Enzymen verbunden. Daher kann eine Bindung aufgrund von mehr als einer Wechselwirkung ein starkes Signal abgeben. Daher ist der indirekte ELISA empfindlicher als der direkte ELISA. Indirekter ELISA kann jedoch aufgrund von Kreuzreaktionen der Sekundärantikörper unspezifische Signale erzeugen.
Abbildung 02: Indirekter ELISA-Test
Was ist der Unterschied zwischen direktem und indirektem ELISA?
Diff Artikel Mitte vor Tabelle
Direkter vs indirekter ELISA |
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| Der direkte ELISA ist im Vergleich zum indirekten ELISA weniger empfindlich. | Der indirekte ELISA ist empfindlicher. |
| Zeit genommen | |
| Der direkte ELISA-Test ist ein schneller Prozess. | Der indirekte ELISA ist zeitaufwändig. |
| Verwendung von Antikörpern | |
| Im direkten ELISA wird nur eine Art von Antikörpern (Primärantikörper) verwendet. | Primär- und Sekundärantikörper werden für den indirekten ELISA verwendet. |
| Verbindung mit Enzymen | |
| Primärantikörper sind mit Enzymen verbunden. | Sekundärantikörper sind mit Enzymen verbunden. |
| Kreuzreaktivität von zweiten Antikörpern | |
| Direkter ELISA eliminiert die Kreuzreaktivität von zweiten Antikörpern. | Der indirekte ELISA ist von der Kreuzreaktivität der zweiten Antikörper betroffen. |
| Signale | |
| Die Signale sind im Vergleich zum indirekten ELISA schwach. | Die Signale werden im indirekten ELISA verstärkt. Daher ist es leicht zu erkennen. |
Zusammenfassung - Direkter vs Indirekter ELISA
ELISA ist eine biochemische Technik, die hauptsächlich in der Immunologie verwendet wird, um das Vorhandensein eines Antikörpers oder eines Antigens in einer Blutprobe eines Patienten nachzuweisen. Es kann über zwei Verfahren durchgeführt werden, die als direkter oder indirekter ELISA bekannt sind. Der direkte ELISA-Test verwendet nur Primärantikörper zum Nachweis des Antigens, während der indirekte ELISA sowohl Primär- als auch Sekundärantikörper verwendet. Im direkten ELISA werden Primärantikörper markiert, während im indirekten ELISA Sekundärantikörper markiert werden. Dies ist der Unterschied zwischen direktem und indirektem ELISA.
