Hauptunterschied - SDS-Seite gegen Western Blot
Western Blot ist eine Technik, die ein bestimmtes Protein aus einer Proteinprobe nachweist. Diese Technik wird über mehrere Schlüsselschritte durchgeführt: Gelelektrophorese, Blotting und Hybridisierung. Die Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-Seite) ist eine Art Gelelektrophorese-Technik, mit der Proteine nach ihrer Größe (Molekulargewicht) getrennt werden. Western Blot ist eine spezielle Folie einer Blotmembran, mit der das gleiche Muster der Proteine auf der SDS-Seite übertragen wird. Der Hauptunterschied zwischen SDS Page und Western Blot besteht darin, dass SDS Page die Trennung von Proteinen in einer Mischung ermöglicht, während Western Blot den Nachweis und die Quantifizierung eines bestimmten Proteins aus einer Mischung ermöglicht. Beide sind nützlich in Proteinanalyse-Studien.
INHALT
1. Überblick und Hauptunterschied
2. Was ist SDS-Seite
3. Was ist Western Blot?
4. Vergleich nebeneinander - SDS-Seite mit Western Blot
5. Zusammenfassung
Was ist SDS-Seite?
SDS Page ist eine Gelelektrophoresetechnik, die zur Proteintrennung verwendet wird. Es wird häufig in der Biochemie, Genetik, Forensik und Molekularbiologie eingesetzt. Sobald die Proteine aus der Probe extrahiert sind, werden sie auf einem Gel aus SDS und Polyacrylamid laufen gelassen. SDS ist ein anionisches Detergens, das verwendet wird, um Proteine (denaturierte Proteine) zu linearisieren und linearisierten Proteinen proportional zu ihrer Molekülmasse eine negative Ladung zu verleihen. Polyacrylamid wird zum festen Träger für das Gel. Denaturierte Proteine, die negativ geladen sind, wandern durch das Gel zum positiven Ende der Apparatur. Je nach Größe der Proteine unterscheiden sich die Migrationsgeschwindigkeiten zwischen den Proteinen und es kommt zu einer Trennung. Daher ist die SDS-Seite nützlich für die Trennung einzelner Proteine anhand ihrer Größe.
Die Herstellung des Polyacrylamidgels zur Fraktionierung von Proteinen ist ein entscheidender Schritt in SDS. Die richtige Konzentration an Polyacrylamid und die Art des verwendeten Vernetzungsmittels beeinflussen die physikalischen Eigenschaften des Gels stark, wodurch die verschiedenen Proteine tatsächlich getrennt werden. Die Porengrößen des Gels sollten für eine effektive Trennung richtig verwaltet werden. SDS Page wird jedoch als hochauflösende Proteintrennungstechnik angesehen.
Die SDS-Seitentechnik weist eine wesentliche Einschränkung bei der Proteinanalyse auf. Da SDS Proteine vor der Trennung denaturiert, ermöglicht es nicht den Nachweis von enzymatischer Aktivität, Proteinbindungswechselwirkungen, Protein-Cofaktoren usw.
Abbildung 01: SDB-Seite
Was ist Western Blot?
Die Western-Blot-Technik ermöglicht den Nachweis eines bestimmten Proteins aus einer Proteinmischung und die Messung der Menge und des Molekulargewichts des Proteins. Western Blot ist die Membran, die während des Blot-Verfahrens verwendet wird, um das Spiegelbild der Proteinmuster im SDS-Polyacrylamidgel zu erhalten. Die Membran, die für das Western Blot verwendet wird, besteht hauptsächlich aus Nitrocellulose oder Polyvinylidendifluorid (PVDF). Die Membran mit dem übertragenen Protein kann verwendet werden, um das gewünschte Protein zu identifizieren. Es erfordert einen hochwertigen Antikörper zum Nachweis des gewünschten Proteins durch Hybridisierung. Der Antikörper bindet an sein spezifisches Antigen und zeigt das Vorhandensein des gewünschten Antigens, das ein Protein ist.
Die Übertragung der Proteine vom SDS-Polyacrylamidgel auf den Western Blot erfolgt durch Elektroblotting. Es ist eine effektive und schnelle Methode, bei der die Proteine aus dem Gel elektrophorisieren und auf die Nitrocellulosemembran (Western Blot) gelangen.
Abbildung 02: Western Blot
Was ist der Unterschied zwischen SDS Page und Western Blot?
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SDS-Seite gegen Western Blot |
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| SDS Page ist eine Gelelektrophoresetechnik. | Western Blot ist eine Technik, die an einer Membran durchgeführt wird, um ein bestimmtes Protein aus einer Mischung nachzuweisen. |
| Verwenden | |
| Die SDS-Seite ermöglicht die Trennung von Proteinen nach ihrer Größe. | Western Blot ermöglicht die Übertragung von Proteinen auf das SDS-Seitengel, ohne dessen Muster zu ändern, und ermöglicht die Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern. |
| Nachteile | |
| Proteindenaturierung, hohe Kosten und Vorhandensein von Neurotoxinchemikalien sind die Nachteile dieser Technik. | Diese Technik ist zeitaufwändig und erfordert erfahrene persönliche und spezifisch kontrollierte Bedingungen. |
Zusammenfassung - SDS Page vs Western Blot
SDS-Seite und Western Blot sind zwei Methoden der Proteinanalyse. SDS Page ermöglicht die einfache Trennung von Proteinen auf einem Gel nach ihrem Molekulargewicht. Western Blot hilft, das Vorhandensein und die Menge eines spezifischen Proteins durch Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern zu bestätigen. Dies ist der Unterschied zwischen SDS Page und Western Blot.
