Unterschied Zwischen SDS-Seite Und Nativer Seite

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2023-12-16 08:37

Hauptunterschied - SDS-Seite vs native Seite

SDS und native Seite sind zwei Arten von Polyacrylamid-Gelelektrophoresetechniken, die in der Molekularbiologie verwendet werden. Der Hauptunterschied zwischen SDS Page und Native Page ist die Art des verwendeten Polyacrylamidgels. In SDS Page wird daher ein denaturierendes Gel verwendet, Moleküle werden basierend auf ihrem Molekulargewicht getrennt. Im Gegensatz dazu werden in Native Page nicht denaturierende Gele verwendet. Daher werden Moleküle aufgrund ihrer Größe, Ladung und Form getrennt.

Bei der Polyacrylamid-Gelelektrophorese (Seite) wird ein Gel verwendet, das durch Polymerisation von Acrylamidmonomeren mit Methylenbisacrylamid hergestellt wird. Das Polyacrylamid ist zäher und hitzebeständiger als Agarose. Die Polyacrylamidgele haben eine kleinere Porengröße, die die effiziente Trennung von Proteinen ermöglicht. Es gibt zwei Haupttypen von Seiten-Setups, nämlich SDS-Seite und native Seite. SDS Page oder Natriumdodecylsulfat Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese trennt Proteine anhand ihres Molekulargewichts. Denaturierungsgele werden in SDS Page verwendet. Native Page verwendet nicht denaturierende Gele und trennt Proteine anhand ihrer Größe, Ladung und Form (3D-Konformation).

INHALT

1. Übersicht und Hauptunterschied

2. Was ist SDS-Seite

3. Was ist native Seite

4. Ähnlichkeiten zwischen SDS-Seite und native Seite

5. Vergleich nebeneinander - SDS-Seite mit nativer Seite in tabellarischer Form

6. Zusammenfassung

Was ist SDS-Seite?

SDS Page ist die häufigste elektrophoretische Technik, mit der Proteine anhand ihres Molekulargewichts getrennt werden. Das Gel wird durch Zugabe von SDS (Natriumdodecylsulfat) hergestellt, das ein Detergens ist. SDS prothetiert Proteine zu Monomeren. SDS ist ein anionisches Waschmittel. Daher fügt es den Proteinen innerhalb eines weiten pH-Bereichs eine negative Nettoladung hinzu. Wenn den Proteinmolekülen aufgrund der Ladungsschwankung die negative Nettoladung verliehen wird, werden die komplexen Strukturen abgebaut. Aufgrund der negativen Ladung ziehen sich Proteine zum positiven Ende hin an. Somit bewegen sich Moleküle mit niedrigerem Molekulargewicht schneller auf der Gelmatrix und können nahe der Anode beobachtet werden, während die Proteine mit höherem Molekulargewicht näher an den Vertiefungen beobachtet werden.

Abbildung 01: SDB-Seite

Die SDS-Bindung an die Polypeptidkette ist proportional zu ihrer relativen Molekülmasse. Daher kann die Molekularmasse auch über SDS Page bestimmt werden. Die Färbung der SDS-Seitengele erfolgt durch Bromphenolblau-Färbung. Die Anwendungen von SDS-Seiten reichen in größerem Umfang, wo sie zur Abschätzung der relativen Molekülmasse und zur Bestimmung der relativen Häufigkeit von Proteinen in einer Proteinmischung verwendet werden können. SDS Page kann auch verwendet werden, um die Proteinverteilung in einer Mischung von Proteinen zu bestimmen. SDS Page wird auch zur Reinigung und Bewertung von Proteinen angewendet. Es wird als vorläufiges Verfahren für das Western Blot und die Hybridisierung verwendet, das wiederum zur Kartierung und Identifizierung von Proteinen verwendet wird.

Was ist Native Page?

Die native Polyacrylamid-Gelelektrophorese (native Seite) verwendet ein nicht denaturierendes Gel. Daher wird der Gelmatrix kein SDS oder ein anderes Denaturierungsmittel zugesetzt. In Native Page basiert die Trennung von Proteinen auf der Ladung und der Größe des Proteins. Daher hängt die Mobilität des Proteins von der Ladung und der Größe des Proteins ab.

Die Ladung des Proteins hängt von den Seitenketten der Aminosäuren ab. Wenn die Seitenketten negativ geladen sind, erhält das Protein insgesamt eine negative Ladung und umgekehrt. Proteine behalten aufgrund der Faltung eine 3D-Konformation bei. Die Faltung resultiert aus den verschiedenen Bindungstypen in Proteinen wie Disulfidbindungen, hydrophoben Wechselwirkungen und Wasserstoffbindungen. Wenn daher die native Seite bei einem neutralen pH-Wert getragen wird, werden die Proteine gemäß der Molekülform des Proteins getrennt. Daher kann Native Page als empfindliche Technik verwendet werden, um die Änderung der Ladung oder Konformation des Proteins zu erfassen.

Der Hauptvorteil der nativen Seite besteht darin, dass das für die Seitenanalyse verwendete Protein nach der Seitenanalyse in seinem ursprünglichen Zustand wiederhergestellt werden kann, da das Protein während des Prozesses nicht gestört wird. Native Page ist eine Technik mit relativ hohem Durchsatz, und die Stabilität des Proteins wird erhöht.

Abbildung 02: Native Seite

Nach Beendigung des Gellaufs kann das Native Page-Gel durch Anfärben mit Bromphenolblau oder einem anderen geeigneten Färbereagenz betrachtet werden. Die Anwendungen von Native Page umfassen die Trennung von sauren Proteinen einschließlich Glykoproteinen wie menschlichem rekombinantem Erythropoetin oder die Identifizierung von Proteinen, die in Rinderserumalbumin (BSA) vorhanden sind.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen SDS-Seite und nativer Seite?

• Sowohl SDS Page- als auch Native Page-Systeme verwenden Polyacrylamidgel als Matrix des Gels.
• Beide werden zur Trennung und Identifizierung von Proteinen verwendet.
• Beide nutzen die elektrophoretische Mobilität, um die Verbindungen zu trennen.
• Beide können vertikal oder horizontal ausgeführt werden (meistens als vertikale Seiteneinstellungen, da die Lauflänge länger ist).
• Die Elektrophoresevorrichtung einschließlich des Geltanks, der Kämme und der Stromversorgung ist für den Betrieb beider Techniken erforderlich.
• Die Visualisierung des Gels kann durch Färbemethoden in beiden Techniken erfolgen.

Was ist der Unterschied zwischen SDS-Seite und nativer Seite?

Diff Artikel Mitte vor Tabelle

SDS-Seite gegen native Seite
SDS Page oder Natriumdodecylsulfat Page trennt Proteine anhand ihres Molekulargewichts und verwendet ein denaturierendes Gel.	Native Page verwendet nicht denaturierende Gele und trennt Proteine anhand ihrer Größe, Ladung und Form (3D-Konformation).
Art des Gels
Ein Denaturierungsgel wird in der SDS-Seite verwendet.	Auf der nativen Seite wird ein nicht denaturierendes Gel verwendet.
Vorhandensein von Sicherheitsdatenblättern
SDS ist als Reinigungsmittel vorhanden, um der Probe auf der SDS-Seite eine negative Ladung zu verleihen.	SDS ist auf der nativen Seite nicht vorhanden.
Trennungsbasis
Die Trennung von Proteinen hängt vom Molekulargewicht des Proteins auf der SDS-Seite ab.	Die Trennung hängt von der Größe und Form des Proteinmoleküls auf der nativen Seite ab.
Stabilität des Proteins
Die Stabilität des Proteins ist auf der SDS-Seite gering.	Die Stabilität des Proteins ist auf der nativen Seite hoch.
Gewinnung des ursprünglichen Proteins
Nicht möglich, da es auf der SDS-Seite denaturiert ist.	Möglich auf der nativen Seite.

Zusammenfassung - SDS-Seite vs native Seite

SDS Page und Native Page sind zwei Arten von Polyacrylamid-Gelelektrophoresetechniken, die zur Trennung von Proteinen verwendet werden. SDS Page wird mit einem Reinigungsmittel namens SDS behandelt. SDS verleiht dem Protein insgesamt eine negative Ladung, die dann zur Denaturierung des Proteins führt. Daher werden die Proteine basierend auf ihrem Molekulargewicht getrennt. Im Gegensatz dazu verwendet die Native Page-Technik kein Denaturierungsmittel. Somit werden die Proteine entweder aufgrund ihrer Größe oder der Form getrennt. Dies ist der Unterschied zwischen SDS-Seite und nativer Seite.