Hauptunterschied - Immunfluoreszenz vs. Immunhistochemie
Die Krankheitsdiagnostik, die molekularbiologische Methoden verwendet, ist zu einem aufstrebenden Bereich der klinischen Labortechnologie geworden. Es umfasst alle Tests und Methoden zur Identifizierung einer Krankheit und zum Verständnis der Ursache einer Krankheit durch Analyse von DNA, RNA oder exprimierten Proteinen in einem Organismus. Schnelle Fortschritte in der molekularen Diagnostik haben die Grundlagenforschung zu übertragbaren und nicht übertragbaren Krankheiten ermöglicht. Diese werden verwendet, um Änderungen der Sequenz- oder Expressionsniveaus in entscheidenden Genen oder Proteinen zu bestimmen, die an einer Krankheit beteiligt sind. Immunfluoreszenz (IF) und Immunhistochemie (IHC) sind zwei derart weit verbreitete Techniken in der Krebsbiologie. IF ist eine Art von IHC, bei der eine Fluoreszenzdetektionsmethode zur Analyse monoklonaler und polyklonaler Antikörper verwendet wird, während IHC chemische Methoden zum Nachweis der monoklonalen und polyklonalen Antikörper verwendet. Dies ist der Hauptunterschied zwischen IF und IHC.
INHALT
1. Überblick und Hauptunterschied
2. Was ist Immunfluoreszenz
3. Was ist Immunhistochemie
4. Ähnlichkeiten zwischen Immunfluoreszenz und Immunhistochemie
5. Nebeneinander-Vergleich - Immunfluoreszenz vs. Immunhistochemie in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung
Was ist Immunfluoreszenz (IF)?
Immunfluoreszenz ist eine Detektionstechnik, bei der die im Assay verwendeten Antikörper unter Verwendung von Fluoreszenzfarbstoffen oder fluoreszierenden Proteinen zum Nachweiszweck markiert werden. Markierte Sekundärantikörper können zu unerwünschten Hintergrundsignalen führen. Daher basiert die IF-Technik derzeit auf der Markierung des primären Antikörpers selbst, um unerwünschte Signale während des Nachweises zu vermeiden. Durch diese Technik wird eine unspezifische Bindung zwischen dem primären und dem sekundären Antikörper verhindert und sie ist schneller, da kein sekundärer Inkubationsschritt beteiligt ist. Die Datenqualität wird ebenfalls verbessert.
01: Doppelte Immunfluoreszenzfärbung für BrdU, NeuN und GFAP
Fluorochrome oder Fluoreszenzfarbstoffe sind Verbindungen, die Strahlung absorbieren können, vorzugsweise ultraviolette Strahlung, die angeregt wird. Wenn die Teilchen aus dem angeregten Zustand in den Grundzustand gelangen, emittieren sie Strahlung, die von einem Detektor erfasst und erfasst wird, um ein Spektrum zu bilden. Es ist von großer Bedeutung, dass die fluoreszierende Markierung für die jeweilige Reaktion kompatibel und stabil ist und ordnungsgemäß an den Antikörper konjugiert werden sollte, um genaue Ergebnisse zu erhalten. Eines der am häufigsten verwendeten Fluorochrome ist Fluoresceinisothiocyanat (FITC), das eine grüne Farbe mit Absorptions- und Emissionspeakwellenlängen von 490 nm bzw. 520 nm aufweist. Rhodamin, ein weiteres in IF verwendetes Mittel, ist rot gefärbt und weist unterschiedliche Absorptions- und Emissionspeakwellenlängen von 553 nm und 627 nm auf.
Was ist Immunhistochemie (IHC)?
IHC ist eine molekulare Testmethode, die angewendet wird, um das Vorhandensein des Antigens in der Zielzelle zu identifizieren und zu bestätigen. Die Zielzelle könnte ein infektiöses Partikel, ein mikrobieller Erreger oder eine maligne Tumorzelle sein. IHC verwendet monoklonale und polyklonale Antikörper, um das Vorhandensein von Antigenen auf der Zelloberfläche der Zielzellen zu bestimmen. Die Technik basiert auf der Antigen-Antikörper-Bindung. Ein Nachweismarker wird an diese Antikörper konjugiert, um die Anwesenheit oder Abwesenheit des bestimmten Antigens nachzuweisen. Diese Marker können chemische Marker wie Enzyme, fluoreszenzmarkierte Antikörper oder radioaktiv markierte Antikörper sein.
Abbildung 02: Durch Immunhistochemie gefärbte Maus-Hirn-Scheibe
Die beliebteste Anwendung von IHC ist die Krebszellbiologie, um das Vorhandensein von bösartigen Tumoren zu identifizieren, sie wird jedoch auch zum Nachweis von Infektionskrankheiten verwendet.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Immunfluoreszenz und Immunhistochemie?
- Immunfluoreszenz und Immunhistochemie finden unter In-vitro-Bedingungen statt.
- Beide Techniken basieren auf dem Antigen-Antikörper
- Beides sind sehr schnelle Techniken.
- Die Ergebnisse der Techniken sind reproduzierbar.
- Beide haben die Datenqualität verbessert.
- Diese Techniken werden in der Diagnostik von Krebs und Infektionskrankheiten eingesetzt.
Was ist der Unterschied zwischen Immunfluoreszenz und Immunhistochemie?
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Immunfluoreszenz vs Immunhistochemie |
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| IF ist eine Detektionstechnik, bei der die im Assay verwendeten Antikörper unter Verwendung von Fluoreszenzfarbstoffen oder fluoreszierenden Proteinen zum Nachweis markiert werden. | IHC ist eine Detektionstechnik, bei der die im Assay verwendeten Antikörper unter Verwendung von Chemikalien oder radioaktiven Elementen zum Nachweis markiert werden. |
| Richtigkeit | |
| Die Genauigkeit ist in der IF-Technik im Vergleich zur IHC höher. | Die Genauigkeit ist bei IHC geringer. |
| Spezifität | |
| IF ist spezifischer. | IHC ist weniger spezifisch. |
Zusammenfassung - Immunfluoreszenz vs. Immunhistochemie
Molekulare Mechanismen haben viele Veränderungen auf dem Gebiet der Medizin bewirkt und zu fortschrittlichen molekularen Testmethoden geführt, die Revolutionen auf dem Gebiet der Diagnostik hervorgebracht haben. Diese Erfindungen haben zu einer schnellen und genauen Identifizierung und Bestätigung der Krankheit geführt, wodurch die erfolgreiche Verabreichung und Herstellung von Arzneimitteln ermöglicht wurde. Diese Techniken werden auch in der Pharmakologie verwendet, um die Ziele von Arzneimitteln zu finden und die pharmakokinetischen Eigenschaften des Arzneimittels während des Arzneimittelstoffwechsels zu bestätigen. IF und IHC sind zwei diagnostische Methoden, die auf dem Konzept der Antigen- und Antikörperbindung basieren, obwohl sich die Nachweismethoden in beiden Techniken unterscheiden. IF verwendet das Prinzip der Fluoreszenz zum Nachweis des Antigens und IHC verwendet das Konzept der chemischen Konjugation zum Nachweis des Antigens. Dies ist der Unterschied zwischen IF und IHC.
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