Hauptunterschied - YAC vs M13 Phagenvektor
Das Klonen von DNA ist ein wichtiger Prozess, der die Vermehrung wichtiger DNA-Fragmente von Organismen ermöglicht. Es erfordert die Verbindung spezifischer DNA mit Vektor-DNA, um rekombinante DNA zu erzeugen, die sich in den Wirtsorganismus umwandelt. Ein Vektor ist ein DNA-Molekül, das sich als Vehikel verhält, um fremdes genetisches Material in eine andere Zelle oder einen anderen Organismus zu transportieren. Es sollte in der Lage sein, sich im Wirtsorganismus zu replizieren und mehrere Kopien rekombinanter DNA zu produzieren. Es gibt verschiedene Arten von Vektoren, die bei der DNA-Klonierung verwendet werden. Das künstliche Hefechromosom (YAC) und der M13-Phagenvektor sind zwei Typen unter ihnen. Der Hauptunterschied zwischen YAC und M13-Phagenvektor besteht darin, dass YAC ein künstliches Chromosom ist, das sich in Hefezellen repliziert, während der M13-Phagenvektor eine einzelsträngige zirkuläre DNA des Bakteriophagen M13 ist, die sich in E-Coli-Zellen repliziert.
INHALT
1. Überblick und Hauptunterschied
2. Was ist YAC
? 3. Was ist M13-Phagenvektor?
4. Vergleich nebeneinander - YAC gegen M13-Phagenvektor
5. Zusammenfassung
Was ist ein YAC-Vektor?
YAC ist ein künstlich gebautes Chromosom, das ein großes Segment fremder DNA tragen und sich in den Hefezellen replizieren kann. Es hat Zentromer-, Telomer- und autonom replizierende Sequenzen, die für die Replikation und Stabilität wesentlich sind. YAC sollte auch einen oder mehrere selektive Marker und Restriktionsstellen tragen, um es zu einem wirksamen Klonierungsvektor zu machen. Große Sequenzen im Bereich von 1000 kb bis 2000 kb können in YAC inseriert und in Hefe übertragen werden.
Abbildung 01: YAC-Vektor
Was ist M13 Phagenvektor?
Der Bakteriophage M13 ist ein Virus, das E-Coli infiziert und repliziert. Das Genom des M13-Bakteriophagen ist klein und etwa 6,7 kb groß. Es ist eine einzelsträngige, zirkuläre und positive Sense-DNA. Dieses Virus infiziert spezifisch E-Coli-Bakterien durch F-Pilus. Sobald es in die ssDNA in das Bakterium eintritt, synthetisiert es seinen komplementären Strang und wird zu dsDNA oder der replikativen Form (RF) von M13. RF kann sich im Wirtsorganismus wie ein Plasmid verhalten. Die dsDNA repliziert innerhalb von E Coli und produziert ssDNA, die neue Phagen trägt. Diese neuen Phagen werden kontinuierlich aus dem E-Coli freigesetzt, ohne die Wirtszelle abzutöten. Die Infektion verlangsamt jedoch das Wachstum von E-Coli. dsDNA kann aus Bakterienzellen extrahiert und als Vektoren bei der DNA-Klonierung verwendet werden. Sie sind als M13-Phagenvektoren bekannt. Sie können leicht manipuliert und ähnlich wie Plasmidvektoren verwendet werden.
Die inhärente Infektionsfähigkeit dieser M13-Phagen dient als gute Qualifikation für die Verwendung als Vektor bei der Klonierung von Genen. Bei der Entwicklung von M13 zu einem Vektor sollten mehrere Elemente in sein Genom eingebaut werden. Sie sind ein Gen für das lac-Repressor (lac I) -Protein, die Operator-proximale Region des lac Z-Gens, ein lac-Promotor und eine multiple Klonierungsstelle (Polylinker). Wenn dsDNA des M13 als Vektoren verwendet wird, kann es als Plasmidvektor behandelt werden. Die Verwendung von ssDNA M13 hat jedoch Vorteile bei der DNA-Sequenzierung und der ortsgerichteten Mutagenese.
Da der M13-Phagenvektor mehrere Klonierungsstellen in der lacZ-Region trägt, können rekombinierte Vektoren leicht durch das Blau / Weiß-Kolonie-Screening auf Agarplatten identifiziert werden, die IPTG und X-Gal enthalten. Auf den Platten erzeugte blaue Plaques enthalten keine rekombinierten Phagen. Daher können Phagen mit Inserts für den Klonierungszweck ausgewählt werden.
Abbildung 02: Bakteriophage M13
Was ist der Unterschied zwischen YAC und M13 Phagenvektor?
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YAC gegen M13 Phagenvektor |
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| YAC ist ein gentechnisch verändertes Chromosom, das ein großes Segment fremder DNA tragen und sich in den Hefezellen replizieren kann. | Der M13-Phagenvektor ist ein viraler Vektor, der vom Bakteriophagen M13 entwickelt wurde und zur Insertion von Fremd-DNA in E-Coli verwendet wird. |
| Zweck | |
| YACs wurden entwickelt, um große Fragmente genomischer DNA in Hefe zu klonieren. | M13-Phagenvektoren werden verwendet, um fremde DNA in E-Coli einzufügen. |
| Länge einfügen | |
| YACs können genomische Inserts in Megabasisgröße (1000 kb - 2000 kb) enthalten. | Die Größe der Einsätze beträgt ca. 1.500 Bit / s. |
| Konstruktion | |
| YAC-DNA ist schwer intakt zu reinigen und erfordert eine hohe Konzentration zur Erzeugung des YAC-Vektorsystems. | Es erfolgt über die cyclische photosynthetische Elektronenkette. |
| Stabilität | |
| YAC ist instabil. | M13-Phagen können leicht extrahiert werden. |
| Größe | |
| Enzyme sind größere Moleküle. | M13-Phagen sind stabiler als YAC. |
Zusammenfassung - YAC vs M13 Phagenvektor
YAC ist ein künstlich konstruiertes Vektorsystem, das eine bestimmte Region des Hefechromosoms verwendet, um große Segmente genetischen Materials in Hefezellen einzufügen. Der M13-Phagenvektor ist ein Vektorsystem, das vom Bakteriophagen M 13 abgeleitet ist und E coli als Wirtsorganismus verwendet. Dies ist der Hauptunterschied zwischen YAC und M13 Phage Vector. Beide sind gleichermaßen nützlich bei der rekombinanten DNA-Technologie und beim Klonen von Genen.
