Hauptunterschied - Warm gegen Kalt Trypsinisierung
Warme und kalte Trypsinisierung sind zwei Methoden zur enzymatischen Disaggregation von Zellen bei der Kultivierung tierischer Zellen. Der Hauptunterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung hängt, wie die Namen andeuten, von der Temperatur ab, bei der das Trypsin zur zellulären Disaggregation hinzugefügt wird. Warm Trypsinisierung erfolgt unter höheren Temperaturbedingungen (36,5 bis 37 0 C) während Kalt Trypsinisierung erfolgt unter Niedrigtemperaturbedingungen.
Während des Prozesses der Primärzellkultivierung tierischer Zellen werden drei Hauptmethoden angewendet, die sich als erfolgreich erwiesen haben. Die drei Methoden umfassen die mechanische Disaggregation von Zellen, die enzymatische Disaggregation von Zellen und die primäre Explantiertechnik. Die enzymatische Disaggregation von Zellen führt zur Isolierung von Zellen und erfolgt durch das proteinabbauende Enzym Trypsin. Daher ist dieser Prozess als Trypsinisierung bekannt. Die Trypsinisierung kann unter zwei verschiedenen Bedingungen durchgeführt werden, nämlich der warmen Trypsinisierung und der kalten Trypsinisierung. Warm Trypsinisierung ist die Methode, die Zellen von der Behandlung mit Trypsin unter warmen Bedingungen bei einer Temperatur von 36,5 bis 37 0C. Kalte Trypsinisierung ist der Prozess der Trypsinbehandlung, der unter kälteren Bedingungen stattfindet, vorzugsweise in Eis, wobei sehr niedrige Temperaturen aufrechterhalten werden.
INHALT
1. Überblick und
Hauptunterschied 2. Was ist warme Trypsinisierung?
3. Was ist kalte Trypsinisierung?
4. Ähnlichkeiten zwischen warmer und kalter Trypsinisierung.
5. Vergleich nebeneinander - warme und kalte Trypsinisierung in tabellarischer Form.
6. Zusammenfassung
Was ist warme Trypsinisierung?
Trypsinisierung kann durchgeführt werden, um die zellulären Komponenten zu disaggregieren, um die Zellen zu isolieren, um eine primäre Zellkultur zu erzeugen. Trypsin ist ein Proteinabbauenzym, und das bei der Trypsinisierung verwendete Enzymgemisch kann entweder ein Rohextrakt oder ein gereinigtes Produkt sein. Der Rohextrakt soll bei der Proteinlyse und beim Zerfall von Zellen effizienter sein, da er andere abbauende Enzyme enthält.
Die warme Trypsinisierung ist die am häufigsten verwendete enzymatische Methode zur Zelldisaggregation, die unter Bedingungen höherer Temperatur stattfindet. Vor der Behandlung durch Trypsinisierung wird das gewünschte Gewebe in kleinere Stücke geschnitten. Dies erleichtert den einfachen Disaggregationsprozess. Das gehackte Gewebe wird dann in einem speziellen Medium gewaschen, das als Dissection Basal Salt-Medium bekannt ist.
Nach Abschluss des Waschschritts werden die Zellen in einen Kolben umgewandelt, der das aktive Enzym Trypsin enthält. Da diese Technik ein warmes Trypsinierung Protokoll schon sagt, wird das Trypsin bei einer Temperatur von etwa 37 platziert 0 für etwa vier Stunden C.
Abbildung 01: Trypsin
Der Inhalt wird unter Verwendung von Zentrifugationsmethoden gemischt und gerührt, um das Protokoll zu vereinfachen und den Disaggregationsprozess zu beschleunigen. Sobald die empfohlene Zeit erreicht ist, können die Zellen aus dem Überstand abgeleitet werden. Die vom Überstand abgeleiteten Zellen werden dann bei einer bestimmten Temperatur und Zeit inkubiert.
Was ist kalte Trypsinisierung?
Kalte Trypsinisierung ist die andere Art der Trypsinisierung, die unter kalten Bedingungen stattfindet. Bei dieser Technik werden die gehackten und gewaschenen Zellen in Fläschchen auf Eis gegeben und dann mit Trypsin getränkt. Die Einweichzeit ist viel länger - etwa 6 - 24 Stunden.
Nach Beendigung des Einweichvorgangs wird das Trypsin aus dem Zelllysat entfernt und die Gewebestücke werden etwa 20 bis 30 Minuten lang bei 37 ° C weiter inkubiert. Die Disaggregation der Zellen wird durch wiederholtes Pipettieren der Gewebemischung bewirkt. Dadurch können sich die Zellen von der Membran lösen und zum Überstand gelangen. Sobald sich die Zellen im Überstand befinden, werden sie inkubiert und bei einer gewünschten Temperatur und Zeitspanne gezüchtet.
Das Kalttrypsinierungsverfahren hat mehrere Vorteile
- Höhere Ausbeute an lebensfähigen Zellen, da die Zellschädigung minimiert wird. Die Zellschädigung wird minimiert, indem keine Zentrifugationsschritte verwendet werden.
- Sehr bequeme Methode.
- Weniger mühsam.
Die Hauptbeschränkung der Kalttrypsinierungsmethode besteht darin, dass große Mengen nicht in einem Fall verwendet werden können.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen warmer und kalter Trypsinisierung?
- Sowohl warme als auch kalte Trypsinisierungsprozesse verwenden das Enzym Trypsin zur Disaggregation von Zellen.
- Sowohl warme als auch kalte Trypsinisierungsprozesse werden in Zellkulturverfahren zur Disaggregation von Zellen verwendet.
- Sowohl bei Warm- als auch bei Kalt-Trypsinisierungsbehandlungsverfahren werden die Zellen vom Überstand abgeleitet.
Was ist der Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung?
Diff Artikel Mitte vor Tabelle
Warme gegen kalte Trypsinisierung |
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| Warm Trypsinisierung ist die Methode, die Zellen von der Behandlung mit Trypsin unter warmen Bedingungen bei einer Temperatur von 36,5 bis 37 0. | Die kalte Trypsinisierung ist der Prozess der Trypsinbehandlung, der unter kälteren Bedingungen, vorzugsweise in Eis mit sehr niedrigen Temperaturen, stattfindet. |
| Protokoll | |
| Die gehackten Gewebestücke werden während des gesamten Verfahrens kontinuierlich bei 37 ° C gehalten. | Die gehackten Gewebestücke werden anfänglich bei eiskalten Temperaturen und dann bei 37 ° C gehalten. |
| Temperatur | |
| Eine warme Trypsinisierung tritt bei 36,5 - 37 0 auf | Kalte Trypsinierung tritt bei eiskalten Temperaturen auf. |
| Zeit verbraucht | |
| Weniger Zeit für den gesamten Prozess (ca. 4 Stunden) der warmen Trypsinisierung erforderlich. | Für die kalte Trypsinisierung ist eine längere Zeit erforderlich (ca. 6 - 24 Stunden). |
| Ausbeute an lebensfähigen Zellen | |
| Niedrige warme Trypsinisierung. | Hoch in kalter Trypsinisierung. |
| Verwendung der Zentrifugation | |
| Für die Disaggregation von Zellen bei warmer Trypsinisierung ist eine Zentrifugation erforderlich. | Bei der kalten Trypsinierung ist keine Zentrifugation erforderlich. |
| Anfangsgewebemenge für die Trypsinisierung | |
| Eine größere Menge Gewebe kann zur warmen Trypsinisierung verwendet werden. | Eine geringere Menge an Gewebe kann bei der kalten Trypsinisierung verwendet werden. |
| Zellschaden | |
| Hoch aufgrund der Zentrifugation bei warmer Trypsinisierung. | Weniger durch kalte Trypsinisierung. |
Zusammenfassung - Warm vs Cold Trypsinization
Die Trypsinisierung ist die Methode zur Verwendung des proteinabbauenden Enzyms Trypsin zur Disaggregation und Herstellung von primären Zellkulturen während des Zellkultivierungsprozesses. Es gibt zwei Haupttechniken der Trypsinisierung, die auf den während des Verfahrens verwendeten Temperaturen basieren. Sie sind warme und kalte Trypsinisierung. Warm Trypsinierung wird bei 37 durchgeführt 0 C während kalte Trypsinisierung unter eiskalten Bedingungen durchgeführt. Obwohl die kalte Trypsinisierung länger dauert, bis sie abgeschlossen ist, soll sie eine höhere Ausbeute an lebensfähigen Zellen aufweisen. Dies ist auf die Tatsache zurückzuführen, dass die Zellschädigung bei der kalten Trypsinisierung minimiert wird, da keine kräftigen Zentrifugationsschritte verwendet werden. Dies ist der Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung.
