Hauptunterschied - AFLP vs RFLP
DNA-Studien haben eine immense Bedeutung für das Verständnis und die Bestimmung phylogenetischer Beziehungen, die Diagnose genetischer Krankheiten und die Kartierung der Genome des Organismus. Verschiedene mit der DNA-Analyse verbundene Techniken werden auch zur Identifizierung eines bestimmten Gens oder einer DNA-Sequenz in einem Pool unbekannter DNA verwendet. Sie sind als molekulare Marker bekannt. Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) und Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) sind zwei solche molekularen Marker (Methoden), die in der Molekularbiologie entwickelt wurden, um genetische Variationen zwischen Organismen nachzuweisen. Beide Methoden sind gleich wichtig und haben Vor- und Nachteile. Der Hauptunterschied zwischen AFLP und RFLP besteht darin, dass AFLP eine selektive PCR-Amplifikation der verdauten DNA beinhaltet, während RFLP keine selektive PCR-Amplifikation der DNA-Fragmente beinhaltet.
INHALT
1. Überblick und Hauptunterschied
2. Was ist AFLP
? 3. Was ist RFLP?
4. Vergleich nebeneinander - AFLP und RFLP
5. Zusammenfassung
Was ist AFLP?
AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) ist ein wichtiges Werkzeug in der Molekularbiologie und wird häufig in der genetischen Variationsanalyse verwendet. AFLP basiert auf der spezifischen PCR-Amplifikation der fragmentierten genomischen DNA und dem Nachweis des Polymorphismus durch Autoradiographien mittels Gelelektrophorese. AFLP trägt in hohem Maße dazu bei, genetische Unterschiede in Stämmen oder eng verwandten Arten verschiedener Königreiche, einschließlich Pflanzen, Tieren, Bakterien und Pilzen, zu identifizieren. AFLP kann mit kleinen Mengen unbekannter DNA-Proben durchgeführt werden. Es erfordert keine Vorkenntnisse in der Sequenz und kein Design der Sonden.
Schritte von AFLP
- Isolierung von DNA
- Verdau der DNA mit Restriktionsendonukleasen
- Ligation der eingeschränkten DNA-Fragmente mit Adaptern
- Selektive Amplifikation der Fragmente mit spezifischen Restriktionsstellen
- Trennung der PCR-Produkte durch Gelelektrophorese
- Visualisierung der Gelmatrix durch Autoradiographie
AFLP ist eine empfindlichere und reproduzierbarere Methode, die bei der DNA-Profilierung mehrerer Taxa einschließlich Pilzen, Bakterien, Pflanzen und Tieren ohne vorherige Kenntnis der DNA-Sequenzen verwendet werden kann. Es hilft bei der Identifizierung geringfügiger Unterschiede zwischen Individuen in Populationen aufgrund seiner hochsensiblen Natur. AFLP ist auch wichtig für die Genomkartierung, forensische Studien, elterliche Tests, Genotypisierung usw.
Abbildung 01: AFLP
Was ist RFLP?
Restriktionsfragmentlängenpolymorphismen (RFLPs) sind eine Technik, mit der genetische Variationen in homologen DNA-Sequenzen nachgewiesen werden können. Es ist die erste Methode, die für die DNA-Profilerstellung entwickelt wurde. Organismen haben einzigartige DNA-Fingerabdrücke oder DNA-Profile. RFLP dient als wichtiges Instrument zur Analyse der Variation zwischen DNA-Profilen intraspezifischer oder eng verwandter Organismen, da homologe Sequenzen unterschiedliche Restriktionsstellen (Orte) aufweisen, die für einen bestimmten Organismus einzigartig sind. Wenn homologe DNA mit spezifischen Restriktionsendonukleasen verdaut wird, führt dies zu unterschiedlichen DNA-Profilen, die für jedes Individuum einzigartig sind. Deshalb,Das Prinzip dieser Methode ist der Nachweis der genetischen Variation zwischen Organismen durch Restriktion homologer DNA mit spezifischen Restriktionsenzymen und Analyse des Fragmentlängenpolymorphismus durch Gelelektrophorese und Blotting. Blotmuster sind für jeden Organismus einzigartig und charakterisieren die spezifischen Genotypen.
Schritte von RFLP
- Isolierung einer ausreichenden Menge an DNA aus Proben
- Fragmentierung der DNA-Proben mit spezifischen Restriktionsendonukleasen in kurze Sequenz
- Trennung der resultierenden Fragmente mit unterschiedlichen Längen durch Agarosegelelektrophorese.
- Übertragung des Gelprofils in eine Membran durch Southern Blot
- Hybridisierung der Membran mit markierten Sonden und Analyse des Fragmentlängenpolymorphismus in jedem Profil
RFLP ist eine sehr wichtige Technik, um die Vererbung von Krankheiten zu erkennen und das Risiko des Auftretens der Krankheit bei Familienmitgliedern zu ermitteln. RFLP wird auch häufig bei der Genomkartierung, der Identifizierung von Kriminellen in der Forensik, bei Vaterschaftstests usw. verwendet. RFLP weist ebenfalls mehrere Einschränkungen auf. RFLP erfordert die Vorkenntnisse von Sequenzdaten, um Sonden für die Hybridisierung zu entwerfen. Es erfordert auch die Isolierung einer ausreichenden Menge an DNA aus der Probe zur Analyse, was in forensischen Studien schwierig ist.
Abbildung 01: RRFLP-Zuordnung
Was ist der Unterschied zwischen AFLP und RFLP?
Diff Artikel Mitte vor Tabelle
ALFP gegen RFLP |
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| AFLP beinhaltet die selektive PCR-Amplifikation der verdauten DNA. | RFLP beinhaltet keine PCR, es sei denn, es ist PCR-RFLP. |
| Sequenzwissen | |
| Vorkenntnisse in der Sequenz sind nicht erforderlich. | Für die Entwicklung von RFLP-Sonden sind Vorkenntnisse in der Sequenz erforderlich. |
| Verlässlichkeit | |
| Das ist zuverlässiger. | Dies ist im Vergleich zu AFLP weniger zuverlässig. |
| Effizienz bei der Erkennung von Polymorphismus | |
| Dies hat eine höhere Effizienz beim Nachweis von Polymorphismus als RFLP. | Dies ist im Vergleich zu AFLP weniger effizient. |
| Kosten | |
| Dies ist im Vergleich zu RFLP etwas teuer. | Dies ist im Vergleich zu AFLP günstiger. |
| Anwendungen | |
| AFLPs wurden für Genomkartierung, DNA-Fingerabdruck, Studien zur genetischen Vielfalt, Vaterschaftstests und Forensik angewendet | Die RFLP-Analyse ist ein wichtiges Instrument für die Genomkartierung, die Lokalisierung von Genen für genetische Störungen, die Bestimmung des Krankheitsrisikos und Vaterschaftstests. |
Zusammenfassung - AFLP vs RFLP
AFLP und RFLP sind zwei Techniken, die als genetische Marker für die Bewertung der Diversität und die Bewertung der genetischen Beziehungen in der Molekularbiologie verwendet werden. AFLP dient als effiziente und empfindliche Methode zum Nachweis des genetischen Polymorphismus zwischen Organismen als RFLP. Obwohl beide Methoden unterschiedliche Effizienz beim Nachweis genetischer Variationen aufweisen, werden sie immer noch für das DNA-Fingerprinting und die Diagnose von Krankheiten verwendet.
