Der Hauptunterschied zwischen prokaryotischer und eukaryotischer Topoisomerase ist der zelluläre Ursprung der Topoisomerase. Prokaryontische Topoisomerasen sind in Zellen prokaryotischen zellulären Ursprungs vorhanden, während eukaryotische Topoisomerasen unter Organismen mit eukaryotischem zellulärem Ursprung vorhanden sind. Darüber hinaus unterscheiden sie sich auch in der Verteilung. Prokaryontische Topoisomerasen sind im Zytoplasma der Zelle vorhanden, während eukaryotische Topoisomerasen im Zellkern verteilt sind.
Eine Isomerase ist eine Gruppe von Enzymen, die die strukturelle Umlagerung von Molekülen katalysieren. Topoisomerase ist eine Art von Isomerasen. Es modifiziert die Topologie des DNA-Moleküls durch Regulierung der DNA-Supercoiling. Es schneidet und versiegelt einen oder beide Stränge des DNA-Duplex. Daher kann DNA repliziert, transkribiert, repariert und chromosomal getrennt werden. Es gibt zwei Arten von Topoisomerasen, nämlich Topoisomerase I und II.